摘要

为了确定新的宿主因子作为逆转HIV-1潜伏潜伏期的靶点，我们在HIV-1感染的假单倍体KBM7细胞系（Hap-Lat）中进行了插入突变基因筛选。突变后，插入被定位到基因组，生物信息学分析结果确定了69个参与维持HIV-1潜伏期的候选宿主基因。在shr-1细胞株中，用短链RNA介导的短链RNA进行了功能验证。我们确认ADK、CHD9、CMSS1、EVI2B、EXOSC8、FAM19A、GRIK5、IRF2Bp2、NF1和USp15是参与维持HIV-1潜伏期的新的宿主因子。染色质免疫沉淀分析表明，CHD9是一种色域解旋酶DNA结合蛋白，通过与HIV-1 5′长末端重复序列（LTR）直接相关来维持HIV-1潜伏期，其缺失导致HIV-1启动子组蛋白乙酰化增加，同时HIV-1潜伏期逆转。FDA批准的抑制剂5-碘酰脲嘧啶、曲美替尼和托吡酯分别靶向ADK、NF1和GRIK5，其潜伏期逆转电位被鉴定。而5-碘结核杆菌素在J-Lat和原代CD4中均表现出显著的细胞毒性+T细胞、曲美替尼逆转J-Lat细胞的潜伏期，但对HIV-1感染的原代CD4细胞无逆转作用+T细胞。重要的是，托吡酯逆转了细胞系模型中潜伏感染的原代CD4的潜伏期+T细胞，尤其是CD4细胞+三名HIV-1感染者（pLWH）的T细胞接受抑制性抗逆转录病毒治疗，未诱导T细胞活化或显著毒性。因此，利用单倍体正向遗传筛选的适应性，我们确定了新的和可药物治疗的宿主因素，这些因素会导致HIV-1潜伏期。

重要性在联合抗逆转录病毒疗法（cART）的存在下，HIV-1潜伏感染细胞的蓄积，是病毒根除的主要障碍。HIV-1潜伏病毒的活化是治疗策略的一部分，其目的是促进感染细胞的清除。利用双色单倍体筛选，我们确定了69个候选基因作为潜伏期维持宿主因子，并在功能上验证了HIV-1潜伏期的基于T细胞的细胞系模型中的10个候选基因。我们进一步证明CHD9与HIV-1的启动子5′LTR有关，而这种联系在激活后就消失了。此外，我们对以ADK、NF1和GRIK5为靶点的FDA化合物的潜伏期逆转潜力进行了表征，并确定GRIK5抑制剂托吡酯是一种具有临床应用潜力的潜伏期逆转剂。