2020年12月23日，由基因有限公司举办的为期三天的“高效ChIp实验技术学习班”在杨陵国家肉牛改良中心基因功能分析实验室顺利结业。据悉，以往的培训地点都是在上海的基因学院总部，这是首次在客户单位处举办。培训由基因公司ChIp实验专家赵珍珍主讲，实验室共有18名师生全程参加。

染色质免疫沉淀技术（ChIp）是研究细胞核内天然状态下DNA与蛋白质相互作用的最好方法。然而由于实验步骤繁琐，涉及到的可变因素多，实验室想要建立高效、可重复的ChIp研究方法，往往要经过很长时间的摸索。借助于美国Covaris聚焦超声打断平台，基因有限公司总结、推广的ChIp实验方案，具有结果可重复性高、使用样本类型广、操作简单等独特的优点，深受历届学员好评。

本次培训历时三天，第一天主要是ChIp实验的理论学习和染色质打断最佳条件摸索实操。在理论部分，赵老师详细地向学员们讲解了ChIp的实验原理、操作流程和注意事项以及下游分析ChIp-qpCR的引物设计、对照设置、数据分析等方面内容。

染色质打断步骤是保障整个ChIp实验成功最重要的环节，针对不同的组织、细胞，往往要进行最佳打断条件的摸索。为此，赵老师亲身示范了从贴壁细胞处理、甲醛交联、核裂解、聚焦超声染色质剪切到最后的DNA纯化以及核酸胶检测的所有步骤,特别强调了应当使用不含甲醇的16%单聚甲醛进行交联等重点细节。同学们不仅认真听取、记录了其中的要点，而且都亲自操作了Covaris的超声打断仪的软件设置，为明天自己动手做准备。



图示染色质剪切最佳条件摸索。分别设立0、2、4、8、12、15、20min时间梯度，参考Covaris truChIp Chromatin Shearing Kit上针对200-700bp目标条带对应的其他仪器参数设置，确定最佳打断时间。

培训第二天，学员们自己操作了染色质打断及质控的步骤，并且在赵老师的指导下确定了染色质免疫沉淀（ Ip ）的实验体系并加入合适的抗体用量过夜孵育。


图示学员们正在使用Nanodrop超微量分光光度计进行DNA定量及污染物检测。

第三天一大早，情绪高涨的同学们早早来到实验室给抗体孵育的体系加上磁珠，两个小时后开始漂洗及将染色体从抗体/蛋白G磁珠上洗脱并解交联。最后，离心柱纯化DNA后做qpCR来分析鉴定几个待测基因的结合、富集情况。大家知道，好的ChIp-qpCR结果实际上需要符合一定的标准。赵老师对于学员们拿到的阳性结果和阴性结果做了解读，尤其对于一些不正常的对照组做了原因分析并提出改进建议。


通过这次培训，学员们普遍感到原本觉得“可怕”的ChIp实验变得简单了，特别是在拿到阳性的定量结果的时候，大家都增强了实验信心。最后，本次ChIp培训班在愉悦的气氛中圆满结束，每个全程参与并经考核合格的学员都得到了由基因集团生命科学中心颁发的结业证书。

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