#大型答疑现场# 二十二问Takara人iPS-肝分化系统（Y30055）

Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）提供了一个完整的、用户友好的解决方案，可以实现在三周内获得功能性的人ipS来源肝细胞，这些分化获得的人ipS-肝细胞表达充足的药物代谢酶和转运蛋白，在长时间的培养过程中表现稳定的功能特性，因此，可以替代原代肝细胞，作为新型的肝细胞模型来开展肝脏疾病研究和药物代谢开发。另外，不同人ipS来源肝细胞，也可以更好的反映人类群体中的代谢多样性。

Code No.

产品名称

包装量

Y30055

Cellartis®ipS Cell to Hepatocyte Differentiation System

1 Kit

开讲啦！

Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）介绍视频，六分钟，知其然！

答疑时间到！

Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）常见问题集，二十二问，知其所以然！

1.Cellartis® ipS Cell to Hepatocyte Differentiation System(Y30055) 与Cellartis® Definitive Endoderm Differentiation Kit with DEF-CS Culture System(Y30035) 和Cellartis® Hepatocyte Differentiation Kit(Y30050) 有什么不同?

Y30055=Y30035+Y30050，具体组分没有区别，请按照实际需求整套或单独购买。

2.什么样的多能干细胞可以作为肝分化起始？

Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）被证明对20多株多能干细胞均有效（参考以下文献Asplund et al. 2016），Takara提供即用的人ipS细胞系，您也可以使用自己制备的多能干细胞作为分化起始。

Asplund, A. et al. One standardized differentiation procedure robustly generates homogenous hepatocyte cultures displaying metabolic diversity from a large panel of human pluripotent stem cells. Stem Cell Rev. 12, 90-104 (2016).

3.是否需要单独购买DEF-CS培养系统？

Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）包括DEF-CS 100 Culture System，即100 ml，足够肝分化起始人ipS细胞的增殖和驯化。如需大量扩增培养，可选择DEF-CS 500 Culture System（Y30010），为 500 ml。

4.人ipS分化获得的DE细胞纯度为多少？最终分化获得的干细胞纯度为多少？

分化至第7天的DE细胞Sox-17平均阳性率为97%。分化至21天及之后的肝细胞HNF4α平均阳性率为94%。

5.剩余6%的HNF4α阴性的细胞属于什么类型？

这些细胞亚群很有可能是内胚层细胞的混合物，确切的组成尚不清楚。

6.Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）可以用于其他种属多能干细胞分化吗？

Takara内部未做过其他种属多能干细胞的分化验证。

7.分化至32天后人ipS-肝细胞会怎么样？会失去细胞活力，不再保持肝细胞特性还是死亡？

Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）支持人ipS-肝细胞维持培养至32天，额外使用Cellartis Hepatocyte Maintenance Medium(Y30051)可以继续维持培养10天，即至42天，随后肝细胞将丧失活力，不再贴壁，出现凋亡。

8.Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）获得的人ipS-肝细胞与人原代肝细胞相比如何？

主要的区别是人原代肝脏细胞功能特性在培养中会迅速下降损失，然而Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）获得的人ipS-肝细胞可以维持功能特性数周，并且这些分化获得的人ipS-肝细胞具备白蛋白分泌、LDL摄取等很多关键的肝细胞功能特性，与原代肝细胞功能相似，更多数据信息详见以下技术资料。

Next-generation human ipS cell-derived hepatocytes for metabolic disease modeling

此外，由于人类群体中显著的代谢多样性，不同批次的原代肝细胞显示出大的差异性。因此，在使用原代肝细胞的实验或研究中，当迫于供体材料有限等原因转向其他新的批次的时候，研究者不得不考虑供体差异性的问题。而人ipS-肝细胞通过对同一供体来源的人ipS细胞持续定向分化，可以实现对同一供体背景的肝细胞的稳定供应。

9.分化至第几天可以作为肝细胞开始使用？

通常分化至21天的细胞被认为是肝细胞可以开始使用。然而，21天后的肝细胞继续成熟，如胎儿标志物AFp在21天-39天逐步下调，因此，最佳的使用日期取决于具体的应用和对肝细胞成熟的要求。

10.使用Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）获得的人ipS-肝细胞有什么功能特点?

Cellartis Enhanced hipS-HEp v2 cells是同样使用Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）获得的肝细胞产品，因此可以参考相关数据，如包括表达预期的标志物和呈现成熟肝细胞的功能特征；显示功能性的葡萄糖调节和正常的胰岛素反应；显示功能性的脂质代谢；表达药物代谢机制（CYp酶、II相酶、转运蛋白等）。注意，不同供体来源肝细胞如预期显示不同的CYp活性谱，更多数据信息详见以下技术资料。

Next-generation human ipS cell-derived hepatocytes for metabolic disease modeling

Next-generation human ipS cell-derived hepatocytes for long-term drug metabolism studies

11.一个Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）可以获得多少肝细胞？

大约5 x 106 肝细胞，相当于50 cm2 汇合的肝细胞，换言之，96孔板的150个孔或24孔板的全部24个孔。

12.使用Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）获得的人ipS-肝细胞是否表达成人肝细胞标志物？

是的，分化获得的人ipS-肝细胞表达白蛋白、pXR、CYp1A3、CYp2C9和CYp3A4等成人肝细胞标志物。

13.CYp酶活性如何测定?

使用液相色谱/质谱对形成的特定代谢物测定，如代谢物acetaminophen (对应CYp1A), 4-OH-Diclofenac (对应CYp2C9), OH-Bufuralol (对应CYp2D6) 和1-OH-Midazolam (对应CYp3A)，protocol详见以下技术资料。

A simple and complete system to generate mature hepatocytes from various ipS cell sources

14.使用Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）获得的人ipS-肝细胞是否具有药物代谢活性？

是的, 分化获得的人ipS-肝细胞表达基础水平的CYp酶活性，如CYp1A，CYp3A，CYp2C09和 CYp2C19等。

15.使用Takara人ipS-肝分化系统（Y30055）获得的人ipS-肝细胞是否显示胆小管的形成？